Sephadex G75är ett slags gelfilterfyllmedel med bra prestanda. Det framställs genom tvärbindning av dextran och epiklorhydrin. Det är en pärlformad gel med en stor mängd hydroxylgrupper, vilket är lätt att svälla i vatten- och elektrolytlösningar. Den maximala uteslutningsgränsen för denna förening är 80000, och den specifika svullnadsgraden beror på mängden torrt harts och driftsförhållanden. Under vissa förhållanden kan till exempel svullnadsgraden av torrt harts vara 519 ml/g. När driftens pH -intervall är 6.210 (5.210 för vissa produkter) kan föreningen förbli stabil. Det rekommenderas att lagra den vid rumstemperatur, sval och bort från ljus i temperaturområdet 430 grader (eller 425 grader) för att bibehålla sin prestanda och stabilitet. Detta ämne är särskilt lämpligt för stora biomolekyler med molekylvikt större än 80000. Huvudsakligen används för avsaltning och buffertbyte av sådana stora biomolekyler. Genom en steg i en - är det möjligt att snabbt avsaltas, ta bort föroreningar och överföra molekyler till en ny buffertlösning. Förutom avsaltning och buffertbyte är Sephadex G-75 också lämplig för reningsprocessen för stora biomolekyler.
 |
 |
Sephadex G75är en dextrangel, som huvudsakligen används för separations- och reningstekniken inom biokemi och molekylärbiologi. De viktigaste användningarna av detta ämne är följande:
I avsaltningsprocessen kan den effektivt ta bort salter (vanligtvis små molekyl oorganiska salter) från biologiska molekyllösningar. Fördelen med detta ämne är att det är lätt att använda, snabbt och kan uppnå effektiv avsaltning utan att förändra biomolekylernas aktivitet. På grund av dess utmärkta kemiska stabilitet och biokompatibilitet är den dessutom lämplig för avsaltningsbehandling av olika biomolekyler, inklusive proteiner, peptider, nukleinsyror, etc. I praktiska tillämpningar är gel -avsaltning vanligtvis kombinerad med andra reningsteknologier som ION -utbyte, affinitetskromatografi, etc. till uppnå omfattande rening och separering av biomoler.
Detta ämne har ett brett utbud av tillämpningar i buffertbyte, särskilt inom områdena biokemi och molekylärbiologi. I processen med proteinrening är det till exempel ibland nödvändigt att överföra proteiner från ett buffertsystem till ett annat buffertsystem som är mer lämpligt för deras stabilitet och aktivitet. Och detta ämne kan effektivt uppnå detta mål; I processen med extraktion av nukleinsyra är det också nödvändigt att separera nukleinsyran från lösningen som innehåller föroreningar och salter och överföra den till en ny buffert för efterföljande operationer. Det är också tillämpligt på detta scenario; Under cellkultur är det ibland nödvändigt att ersätta odlingsmediet eller bufferten för att upprätthålla celltillväxt och aktivitet. Det kan användas för att ta bort skadliga ämnen från gamla kulturmedier eller buffertar och introducera nya kulturmedier eller buffertar.
Molekylsiktning
I proteinforskning och beredningsprocesser är det vanligtvis nödvändigt att separera målproteiner från komplexa blandningar. Det kan separera proteiner baserat på deras storlek och därmed uppnå proteinrening. Genom att justera elueringsbetingelserna, såsom jonstyrkan och pH -värdet för eluentet, kan proteinernas separationseffektivitet ytterligare optimeras. Förutom proteiner och nukleinsyror kan det också användas för separering och rening av andra biomolekyler, såsom polysackarider, enzymer, antikroppar, etc. Rörelseshastigheten för dessa biomakromolekyler i gel beror på deras storlek och form, för att uppnå effektiva separation. Även om detta ämne inte direkt används som ett verktyg för bestämning av molekylvikt, kan det tjäna som ett hjälpverktyg vid bestämning av molekylvikt.
I processen med proteinrening är det vanligtvis nödvändigt att ta bort små molekylföroreningar såsom salter, små molekylmetaboliter, obundna ligander etc. från proteinlösningen. Detta ämne kan effektivt ta bort dessa små molekylföroreningar från proteinlösningar och därmed förbättra proteins renhet. Dess molekylsikteffekt gör det möjligt att avlägsnas dessa små molekylföroreningar, vilket resulterar i renare nukleinsyror. Enzympreparat innehåller vanligtvis små molekylföroreningar såsom oreagerade substrat, hämmare, metaboliter, etc. Dessa föroreningar kan påverka enzymernas aktivitet och stabilitet. Genom gelfiltreringen av materialet kan dessa små molekylära föroreningar effektivt avlägsnas och renheten hos enzympreparatet kan förbättras. Förutom proteiner och nukleinsyror,
Simulera intercellulär signaltransduktion
Intercellulär signaltransduktion är kärnregleringsmekanismen för livsaktiviteter, som involverar komplexa processer såsom celligenkänning, signalomvandling och fysiologisk respons. Traditionell forskning förlitar sig ofta på levande cellmodeller, men det finns begränsningar som komplexa signalnätverk och flera störande faktorer.Sephadex G75är ett klassiskt Dextran Gel -filtreringsmedium. Dess porösa struktur och molekylsikteffekt ger en unik fysisk modell för att simulera intercellulär signaltransduktion.
En fysisk modell för att simulera intercellulär signaltransduktion med Sephadex G-75
Simulering av intercellulära gapskorsningar
GAP -korsning är en hydrofil kanal som bildas mellan angränsande celler genom en länk, vilket möjliggör fritt utbyte av små molekyler med en molekylvikt<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Gradientbildning av signalmolekyler: Olika koncentrationer av signalmolekyler (såsom cAMP, Ca ²+) laddas i gelkolonnen. Skillnaden i diffusionshastighet för små molekyler i gelporen kan observeras genom molekylsikteffekten, och gradientöverföring av kemiska signaler mellan celler kan simuleras.
Synergistisk svarssimulering: Två interagerande molekyler (såsom ligand och receptor) laddas på båda ändarna av gelkolonnen respektive och deras bindande kinetik analyseras genom elueringstidsskillnaden för att simulera molekylärigenkänningsprocessen i direktkontaktkommunikation mellan celler.
Simulering av molekylkontakt på membranytan
Kommunikationen mellan membranytmolekyler förlitar sig på de specifika interaktionerna mellan cellmembranytproteiner. Sephadex G-75 kan simulera denna process genom funktionell modifiering:
Receptorligandbindningsexperiment: Biotinylerade receptorproteiner (såsom EGFR) är fixerade på ytan av gelpartiklar, fluorescerande märkt ligander (såsom EGF) fångas genom streptavidin -biotinsystemet och den bindande signalintensiteten övervakas med en fluorescensdetektor för att kvantifiera mottagarens ligand.
Konkurrenskraftig bindningsanalys: Förbelastning av receptor -ligandkomplexet i gelkolonnen, tillsätt konkurrerande hämmare av olika koncentrationer (såsom anti EGFR -antikroppar), beräkna hämningskonstanten (KI) genom elueringstoppskiftet och simulera interventionseffekten av läkemedel på cellsignalvägar.
Simulering av kemisk signalöverföring
Kemisk signaltransduktion förlitar sig på diffusion av kemiska signalmolekyler (såsom hormoner och cytokiner) som utsöndras av celler genom kroppsvätskor eller extracellulär matris till målceller. Sephadex G - 75 kan konstruera en tredimensionell diffusionsmodell:
Paracrinsystemsimulering: Sekretesceller (såsom makrofager) och målceller (såsom T -celler) är kapslade in i gelmikrosfärer, och aktiveringsstatusen för målceller (såsom CD69 -uttryck) observeras genom CO -kultur för att simulera den lokala effekten av paracrinsignaler.
Endokrin signalöverföring: Fluorescerande märkta hormoner (såsom insulin) laddas i gelkolonnen, och deras interaktion med gelporer förutses genom elueringstiden, och halva - liv av hormoner i blodcirkulation och målorganision förutses genom att kombinera matematiska modeller.
Ansökningsfall av Sephadex G-75 i cellsignaleringsforskning
Forskning om transduktion av röda blodkroppar och integrinfunktion
Trombocyt vidhäftningsreceptorintegrin IIB 3 är det vanligaste glykoproteinet på ytan av blodplättmembranet och är avgörande för hemostas och trombusbildning. Studera användningen av Sephadex G-75 för att simulera interaktionen mellan blodplättar och subendotelial kollagen:
Integrinaktiveringsmodell: Det renade integrinet IIB 3 fixerades på ytan av gelpartiklar och lösligt fibrinogen (FG) tillsattes som ligand. Den bindande kinetiken detekterades genom ytplasmonresonans (SPR). Det visade sig att affiniteten hos integrin till FG efter aktivering förbättrades signifikant (KD reducerades från μm till nm).
Antiplatelet -läkemedelsscreening: Preload Integrin FG -komplex i gelkolonn, tillsätt antiplateletläkemedel i olika koncentrationer (såsom tirofiban), beräkna hämningshastigheten för läkemedel vid integrinaktivitet genom elueringstoppförskjutning och ge en hög - genomströmnings screeningplattform för utvecklingen av nya antitrotiska läkemedel.
Reglering av tumörrelaterade signalvägar
Tumörceller främjar proliferation och metastas genom onormal aktivering av signalvägar såsom MAPK och PI3K/Akt. Sephadex G-75 kan användas för att isolera och rena nyckelproteiner i signalvägar:
EGFR-signalvägsforskning: EGFR-protein renades genom Sephadex G-75 gelfiltrering, och dess fosforyleringsstatus analyserades med masspektrometri. Det visade sig att fosforyleringsnivån för Y1068 och Y1086 -platserna för EGFR ökades signifikant efter EGF -stimulering, vilket aktiverade nedströms ERK1/2 och Akt -signaler.
Läkemedelsresistensmekanismanalys: I läkemedel - resistenta gastriska cancerceller (SGC7901/VCR), var UHRF1-protein isolerat och renades och renades av Sephadex G-75, och det konstaterades att dess överuttryck kan hämma aktiveringen av apoptos relaterade proteiner (såsom caspase-3), och reducera kemoterapi.
Immuncellsignalering och polysackaridreglering
Röda algerpolysackarider (BFP) förbättrar immunsvaret genom att aktivera NF - κ B- och MAPK -signalvägar i makrofager. Forskning om separering och rening av BFP och dess komponenter (F1, F2, F3) med Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% erhölls med Sephadex G-75 gelfiltration i kombination med DEAE-cellulosa 52-jonbytekromatografi, och deras molekylvikter var 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa respektive 45 kDa.
Signalvägsaktivering: I RAW264.7 -makrofagmodellen kan BFP och dess komponenter signifikant inducera utsöndring av NO och TNF -, och dess mekanism involverar NF {{2} κ B -kärntranslokation och fosforylering av JNK, ERK och P38 MAPK. De renade komponenterna separerade med Sephadex G - 75 visade att F1 hade den starkaste aktiveringseffekten på NF - κ B- och MAPK -vägar (ökade ingen produktion med 2,5 gånger och TNF -sekretion med 3 gånger).
Populära Taggar: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, leverantörer, tillverkare, fabrik, grossist, köp, pris, bulk, till salu